3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Эффективность фосфатов калия на рост мицелия фитопатогенных грибов представлена в таблице 1. Процент ингибирования роста мицелия грибов варьировался в зависимости от типа фосфатного соединения, концентрации и типа гриба. Процент ингибирования роста мицелия варьировал от 0 до 52,2% и от 0 до 100% для KH2PO4 и K2HPO4 соответственно. KH2PO4 в концентрации 3% вызывал наибольшее ингибирование (52,2%) роста мицелия R. solani. С другой стороны, K2HPO4 в концентрации 1,5% продемонстрировал наибольшее ингибирование (100%) роста мицелия S. sclerotiorum (табл. 1). В этом исследовании в большинстве случаев K2HPO4 вызывал значительно более сильное ингибирование роста мицелия, чем KH2PO4. Среди протестированных грибов наиболее устойчивыми оказались F. moniliforme и F. oxysporum к обоим соединениям фосфата калия (табл. 1). Абдель-Кадер и др. [19] изучали in vitro ингибирующее действие K2HPO4 на рост мицелия различных почвенных патогенных грибов: Alternaria solani Sorauer, F. solani, F. oxysporum, R. solani, S. rolfsii Sacc. и Pythium sp. Они обнаружили что K2HPO4 проявляет усиление ингибирующего действия на тестируемые грибы в ответ на увеличение его концентрации. Кроме того, K2HPO4 в концентрации 1% резко снижал рост мицелия, который колебался от 50 до 64,4% всех протестированных грибов. Полное ингибирование роста мицелия всех тестируемых грибов наблюдалось при добавлении в ростовую среду (КФА) К2НРО4 в концентрации 4%. Бланчински и др. [20] обнаружили, что KH2PO4 оказывает ингибирующее действие на рост мицелия A. solani и A. macrospora Zimm., а также на прорастание спор A. solani. Фосфатные и калиевые соли могут обладать прямыми противогрибковыми свойствами, поскольку микроскопические наблюдения показали прямое влияние фосфатов на коллапс и деформацию конидий и мицелия на S. fuliginae в огурцах [21, 22] и на L. taurica. в перце [10]. Эффективность фосфатов калия на прорастание спор и удлинение зародышевой трубки фитопатогенных грибов представлена в таблице 2. Процент ингибирования прорастания спор и зародышевой трубки варьировал от 0 до 100% для обоих соединений. KH2PO4 и K2HPO4 подавляли прорастание спор и удлинение зародышевых трубок ржавчинных грибов (U. appendiculatus и P. triticina) более эффективно, чем Fusarium spp. KH2PO4 в концентрации 1% и K2HPO4 в концентрации 1,5% полностью ингибировали прорастание спор и удлинение зародышевых трубок U. Appendiculatus и P. triticina соответственно. Оба соединения калия оказались неэффективными в ингибировании прорастания спор F. nivale (табл. 2). В этом исследовании разница между эффективностью in vitro и in vivo показывает, что взаимодействие фосфатного соединения с тканью хозяина может включать биохимические реакции, такие как защитный механизм хозяина, способствующий борьбе с ржавчинными грибами. Кроме того, важную роль может играть взаимодействие фосфатных соединений с агаризованной средой. В тестах in vitro, представленных в Таблице 1, K2HPO4 показал наилучшую общую эффективность против S. sclerotiorum и M.phaseolina, поэтому он был выбран для дальнейшего тестирования в почвенных тестах. Эффективность K2HPO4 на рост мицелия M.phaseolina и S. sclerotiorum в почвенных испытаниях представлена в таблице 3. K2HPO4 в концентрации 2% полностью подавлял рост мицелия S. sclerotiorum в почвенных испытаниях.
Для оценки защитной активности KH2PO4 и K2HPO4 проводили опрыскивания листьев за 2 и 24 ч до инокуляции возбудителя. Эффективность опрыскивания листьев фосфатами калия на пустулы, вызванные P. triticina и U. Appendiculatus, в горшечных экспериментах представлена в таблице 4. В горшечных экспериментах, проводимых в контролируемых условиях, предпрививочные (защитные) обработки KH2PO4 и K2HPO4 все протестированные концентрации, за исключением 0,25%, были эффективны в борьбе с ржавчинными грибами (P. triticina и U. Appendiculatus). Внекорневая обработка KH2PO4 в самой высокой протестированной концентрации (1%) обеспечивала контроль заболеваний против P. triticina и U. Appendiculatus на 66,1-72,0% и 70,3-80,2% соответственно. В той же концентрации внекорневые подкормки K2HPO4 обеспечивали контроль заболеваемости P. triticina и U. ap-pendiculatus на 64,0-70,8% и 67,1-73,6% соответственно (табл. 4). Для оценки лечебной активности KH2PO4 и K2HPO4 проводили опрыскивания листьев через 24 ч после инокуляции возбудителя. Однако постинкуляционная (лечебная) обработка обоими соединениями фосфата калия оказалась неэффективной в борьбе с P. triticina и U. Appendiculatus (таблица 4). Эти данные позволяют предположить, что KH2PO4 и K2HPO4 не обладают постинокуляционной активностью против обоих ржавчинных грибов и их следует использовать в качестве защитных фунгицидов. Настоящее исследование является первым отчетом, в котором оценивалась эффективность опрыскивания листьев KH2PO4 и K2HPO4 против P. triticina и U. Appendiculatus. Литературные данные по оценке эффективности KH2PO4 и K2HPO4 в защите растений от возбудителей ржавчины весьма ограничены [23]. Проведенные до сих пор исследования в основном концентрировались на возможности использования этих калийфосфатов для борьбы с мучнистой росой, возникающей на различных видах растений [9-11, 24-28]. Реувени и др. [24] сообщили, что внекорневая обработка трех фосфатных солей (K2HPO4, KH2PO4 или NH4H2PO4 в концентрациях 1,74, 1,36 или 1,15% соответственно) на верхней поверхности первого настоящего листа огурца перед инокуляцией S. fuliginea снижает пораженность мучнистой росой на 2-5 листьях максимум на 94% по сравнению с необработанными. Коллина [25] сообщил, что KH2PO4 снижает процент площади листьев, зараженных S. fuliginea, по сравнению с необработанными растениями. Пасини и др. [26] обнаружили, что еженедельное опрыскивание KH2PO4 обеспечивает хороший контроль против Sphaerotheca pannosa (Wallr. ex Fr.) Lev. вар. rosae Wor., на розах. Реувени и др. [10] показали, что опрыскивание 1% раствором KH2PO4 верхних поверхностей нижних листьев перца, выращенного в теплице, вызывает местный и системный контроль L. taurica. На основании полученных результатов авторы предположили, что KH2PO4 можно применять в качестве альтернативного средства борьбы с мучнистой росой перца. Mosa [27] определил эффективность KH2PO4 или K2HPO4 при опрыскивании листвы до или после инокуляции при борьбе с мучнистой росой, вызываемой Erysiphe betae (Vanha) Weltzien, на сахарной свекле. Все обработки снизили заболеваемость мучнистой росой по сравнению с контролем. Перрено [29] предложил один или несколько из следующих механизмов для объяснения эффекта калия, подавляющего болезни: (а) прямое воздействие на размножение, развитие и выживание патогенов, (б) прямое влияние на метаболизм растений и, следовательно, на обеспечение питанием патогена и (c) влияние защитных реакций растений и функции устьиц, которые влияют на укоренение и распространение патогена внутри растения. Фосфаты проявляют противогрибковую активность путем индукции системной приобретенной резистентности (SAR) [30, 31]. Предположили [32], что фосфаты могут вызывать системную резистентность путем секвестрации кальция внутри организма-мишени, тем самым воздействуя на мембраны и нарушая компартментацию клеток, а также вызывая высвобождение или синтез гидролитических ферментов. Согласно этой гипотезе, действие гидролитических ферментов клеточных стенок приводит к высвобождению пектиновых фрагментов клеточной стенки, тем самым вызывая выработку «сигнала тревоги». Роль калия в передаче сигналов стресса становится важной темой [33], которая требует все большего внимания в будущих исследованиях молекулярных биологов, физиологов растений и агрономов [34]. Еще одной ролью калия в растениях является смягчение стресса, особенно в условиях засухи, засоления и при патогенном заражении [33, 35]. Защитные реакции растений являются результатом сложной сети сигнальных событий, которая включает взаимодействие киназ, гормонов и активных форм кислорода (АФК), что приводит к перепрограммированию транскриптома растения и выработке защитных соединений для защиты растений. влияют на резистентность [33, 36-38]. АФК играют важную роль в защите растений от различных патогенов. Супероксид-анион, перекись водорода и гидроксильный радикал являются тремя основными формами АФК. Эти молекулы высокореактивны и токсичны и могут привести к окислительному разрушению клеток. Быстрое накопление АФК растений в месте атаки патогена, явление, называемое окислительным взрывом, токсично непосредственно для патогенов и может привести к гиперчувствительной реакции (ГР), в результате которой образуется зона гибели клеток-хозяев, предотвращающая дальнейшее развитие. распространение биотрофных патогенов [39]. Помимо описанных прямых эффектов, АФК могут также служить сигналами, приводящими к активации других защитных механизмов [40]. Пероксидазы и никотинамидадениндинуклеотидфосфат (НАДФН) оксидазы являются двумя основными ферментными системами, которые, как обнаружено, ответственны за накопление АФК в ответ на инфекцию патогена, и эта реакция может быть результатом одного или обоих типов активности фермента. 41]. Быстрое поглощение фосфатов тканями растений и их чрезвычайная мобильность внутри тканей, а также их низкая стоимость, низкая токсичность для животных, сравнительная экологическая безопасность и питательная ценность делают их идеальными внекорневыми удобрениями. Комбинированная программа фосфатов плюс своевременное применение обычных фунгицидов может снизить развитие устойчивых к фунгицидам рас патогена в полевых условиях [28]. Внесение солей перед сбором урожая легко осуществить, поскольку их можно производить с использованием того же оборудования, которое используется для обычных химических применений. Другими преимуществами солей являются их низкая стоимость и отсутствие законодательных ограничений на их использование [14].
4. ВЫВОДЫ
Результаты этого исследования показали, что использование моно- и дикалийфосфатов может быть действенным методом альтернативного контроля фитопатогенных грибов. Оба фосфатных соединения потенциально могут использоваться отдельно при органическом выращивании или в сочетании с синтетическими фунгицидами в рамках программы комплексной борьбы с вредителями (IPM) в традиционном сельском хозяйстве. Однако это лишь предварительное исследование эффективности фосфатов калия на фитопатогенные грибы. Эффективность этих соединений должна быть исследована в естественных условиях окружающей среды и при различных взаимодействиях хозяин-патоген, прежде чем рекомендовать их использование. Результаты настоящего исследования обеспечат нетоксичный и экологически безопасный вариант альтернативного контроля фитопатогенных грибов.