Опыт по опровержению теории питания растений

Опыление, цветение, корневая система, сокодвижение и др.
Miсhailа
Освоившийся
Сообщения: 44
Зарегистрирован: 09 дек 2015, 15:24
Город: Беларусь.Минск
Подпись: Михаил
Благодарил (а): 0
Поблагодарили: 0

Re: Опыт по опровержению теории питания растений

Сообщение Miсhailа »

biocenosis писал(а): Повышение концентрации углекислого газа в почве и в воздухе выше определенного предела губительно для растений.
Тоже самое касается и минеральных веществ N, P, K, их концентация в почве не должна превышать определенных порогов.
В разумноподготовленной почве (структурированной,газопроницаемой,неизбыточно увлажненной, населенной "биотой", содержащей органику -гумус стабильный и лабильный и др. орг. запчасти :pardon: ) надо еще очень постараться, чтобы превысить. Кстати углекислоту в почву добавлять не фантастика-есть в России исследования и официально опубликован полевой опыт людей. Не дачников ;)
В воздухе его и так всегда (в основном) недостаток. Как бы повысить в зоне растений.

А вот с N, P, K превысить порог запросто. С минералкой работать -дело тонкое,и достаточно скользкое, реальной грамотности требует.
Аватара пользователя
biocenosis
Завсегдатай
Сообщения: 1280
Зарегистрирован: 30 авг 2015, 17:11
Город: Саратов
Подпись: Владимир
Благодарил (а): 0
Поблагодарили: 0

Re: Опыт по опровержению теории питания растений

Сообщение biocenosis »

Miсhailа писал(а): ...надо еще очень постараться, чтобы превысить. Кстати углекислоту в почву добавлять не фантастика-есть в России исследования и официально опубликован полевой опыт людей. Не дачников
Да и с кислородом тоже надо ещё постараться ))
Корни растений чувствительны к концентрации кислорода в почве, так как он идёт на окисление глюкозы и выработку энергии, короче говоря на дыхание корней.
Miсhailа
Освоившийся
Сообщения: 44
Зарегистрирован: 09 дек 2015, 15:24
Город: Беларусь.Минск
Подпись: Михаил
Благодарил (а): 0
Поблагодарили: 0

Re: Опыт по опровержению теории питания растений

Сообщение Miсhailа »

biocenosis писал(а): Да и с кислородом тоже надо ещё постараться ))
Корни растений чувствительны к концентрации кислорода в почве, так как он идёт на окисление глюкозы и выработку энергии, короче говоря на дыхание корней.
Большого старания не требуется.Этим талантом обладает подавляющее большинство.Достаточно хорошенько полить "под корень".
А кроме глюкозы , ничего больше там в кислороде не нуждается? Да и в процессе фотосинтеза кислород из воды только в атмосферу выходит?
Аватара пользователя
biocenosis
Завсегдатай
Сообщения: 1280
Зарегистрирован: 30 авг 2015, 17:11
Город: Саратов
Подпись: Владимир
Благодарил (а): 0
Поблагодарили: 0

Re: Опыт по опровержению теории питания растений

Сообщение biocenosis »

Miсhailа писал(а): Большого старания не требуется.Этим талантом обладает подавляющее большинство.Достаточно хорошенько полить "под корень".
А кроме глюкозы , ничего больше там в кислороде не нуждается? Да и в процессе фотосинтеза кислород из воды только в атмосферу выходит?
Обычно в воздушной среде ничего с кислородом рукотворного не делают. Концентрацию углекислого газа в воздухе повышают иногда и только в закрытом грунте.
Кислород требуется всем без исключения живым тканям растения для дыхания. Однако в почве концентрация кислорода меньше, чем воздухе, за счёт потребления его почвенными микроорганизмами. Углекислого газа в почве наоборот избыток и он выделяется из почвы.
В корнях из-за дыхания концентрация СО2 выше, чем в почве.
Аватара пользователя
Филиппов Олег
Завсегдатай
Сообщения: 3472
Зарегистрирован: 25 июл 2015, 19:09
Город: г.Волгоград
Подпись: Лесничий
Благодарил (а): 0
Поблагодарили: 21 раз

Re: Опыт по опровержению теории питания растений

Сообщение Филиппов Олег »

dmitr писал(а):Следовательно , единственный способ уравнять количество выделенного кислорода и поступившего СО2 заключается в том , чтобы существенно понизить градиент парциального давления кислорода . То есть разница в давлении кислорода внутри листа и снаружи должна быть крайне незначительна. А именно , при воздушном снабжении СО2 чтобы уравнение фотосинтеза соблюдалось разница давлений кислорода вне листа и внутри листа должна быть не более 0.0004 %. Таблица же Олега показывает , что в среднем для преодоления различных мембран , различных сред для СО2 необходима разность парциальных давлений в среднем 25 %. В принципе самая малая разность парциальных давлений для СО2 , необходимая для преодоления сред, согласно таблицы равна 5% .
Как видим от 0.0004 % это очень далеко.
Отношение концентраций О2/СО2 в атмосфере в присутствии 21% О2 и 0,0325% СО2 составляет 646/1,а в воде при 25 градусах цельсия оно равно 24/1.
Это различие связано с тем,что СО2 лучше растворяется в воде,чем О2,то есть коэффициент абсорбции для СО2 гораздо выше.
как мы мыслим, так и делаем .....
Аватара пользователя
Владимир Александрович
Завсегдатай
Сообщения: 1068
Зарегистрирован: 09 фев 2010, 19:11
Город: Волгоград
Подпись: Владимир
Благодарил (а): 0
Поблагодарили: 0

Re: Опыт по опровержению теории питания растений

Сообщение Владимир Александрович »

Miсhailа писал(а): Кстати углекислоту в почву добавлять не фантастика-есть в России исследования и официально опубликован полевой опыт людей. Не дачников ;)
В воздухе его и так всегда (в основном) недостаток. Как бы повысить в зоне растений.
Совершенно верно,опытов подобных много.И не дачниками проведенные.И статью,посвященную подведению итогов таких экспериментов,года 2-3 назад мы разбирали."Реакция растений на орошение водой ,обогащенной углекислым газом",авторы Енох и Олесен написана в 1993 году.Вот снова некоторые выдержки из данной статьи:
"В этой презентации мы попытались оценить не только недавние работы последнего десятилетия, но и более ранние исследования,начиная с 1866 года. Некоторые эксперименты показали увеличение роста, в то время как другие исследования не обнаружили никакого эффекта или обнаружили даже вредное воздействие. Попытаемся объяснить механизмы и процессы под влиянием орошения водой, обогащенной CO2."
"Более тщательные эксперименты Столвийка и Тимана (1957) позволили заключить, что корневое поглощение СО2 значительно меньше 1% от его суммарного листового усвоения при фотосинтезе. Они нашли стойкое стимулирование роста корней от содержания углекислого газа в корневой зоне гороха до значений 0,5%,но останавливает рост корней при содержании СО2 в 1,5%. По определённым оценкам, содержание СО2 в некоторых почвах уже выше оптимального и его увеличение будет иметь пагубные последствия для гороха. Вознесенский (1958) нашёл, что корневое усвоение СО2 всегда незначительно и всегда бывает менее 5% от общего усвоения растением. Бергквист (1964) нашёл, что при содержании СО2 в почве 0,6%, поглощение его корневой системой во много раз меньше потерь при корневом дыхании. Опыты Сауербека и Фубра (1964, 1965 а, б) определили 0,2% корневого усвоения углерода от общей массы усвоенного . В некоторых экспериментах значение углерода, связанного с корневым усвоением доходило до 1,3% от общего уровня углерода, но в полевых условиях может не превысить и 0,1% зафиксированного углерода".
"Хеджи (1985) показал, что даже в самом лучшем случае, скорость поглощения СО2 с транспирационным потоком, может только увеличить внутриклеточную концентрацию СО2 примерно на 10%, таким образом, даже теоретически доля корневого СО2 не может быть большой в общей доле углекислого газа, участвующего в фотосинтезе. Его расчёты показывают, что процент корневого поглощения углерода всегда ниже 5%, а обычно ниже 1% от всей фотосинтетической доли".
"Эпплеман (1922) обнаружил, что в некоторых с/х почвах штата Мериленд на глубине около 10см максимальное содержание СО2 в почвенной атмосфере летом составляет 5%, так что 7%, которое используется в примере, является более чем реальным его максимальным значением. Таким образом, мы можем сделать вывод, что у зелёных растений расход СО2 на фотосинтез на 95 – 99% состоит из воздушного питания. Остальное является производным почвенного дыхания и даже корневого дыхания самого растения."
"Исследовав предмет в нашей литературе, мы нашли лишь одну заслуживающую доверия ссылку (Кили, Осмонд & Raven, 1984) о наземном растении, которое получает большую часть своего углерода через свои корни. Это растение, 2-4 см высотой без устьиц, Slylites andicola, найдено в высоких Андах (на более чем 4000 м над уровнем моря) в Перу. Растение обладает некоторыми из характеристик, найденных в растениях с САМ- метаболизмом (CAM)".
"Увеличение урожайности на 2,9% в новых экспериментах с применением СО2-обогащённой воды соответствует статистически точным данным (ряды тестов Вилконсона с z=-6-983, р =0-0001)."
Так что,Миша,можешь затрачиваться на обогащение почвы СО2,повысишь урожай на 3%.Флаг тебе в руки!
С уважением,Владимир.
Аватара пользователя
dmitr
Завсегдатай
Сообщения: 3013
Зарегистрирован: 01 окт 2012, 13:19
Город: Ижевск, дача широта 55.89, долгота 53.082
Подпись: Дмитрий
Благодарил (а): 0
Поблагодарили: 2 раза

Re: Опыт по опровержению теории питания растений

Сообщение dmitr »

Владимир Александрович писал(а):Они нашли стойкое стимулирование роста корней от содержания углекислого газа в корневой зоне гороха до значений 0,5%...
А как же Владимир ты объяснишь чёткую корреляцию процессов роста корневой системы и содержания СО2 в почве?
С уважением Дмитрий Артемьев
Аватара пользователя
Владимир Александрович
Завсегдатай
Сообщения: 1068
Зарегистрирован: 09 фев 2010, 19:11
Город: Волгоград
Подпись: Владимир
Благодарил (а): 0
Поблагодарили: 0

Re: Опыт по опровержению теории питания растений

Сообщение Владимир Александрович »

Расскажу о самом интересном, что неожиданно обнаружил в просторах интернета. Появилось время,покопался в сети и нашел интернет-версию журнала"Plant Physiology",издаваемого в Штатах. Достаточно интересный журнал,единственно,что неудобно-издается на английском языке. Но если очень хочется,можно подключить переводчик и статьи становятся понятны.Вот ссылка на журнал. В номере 171 за май 2016 г. есть статья группы немецких исследователей под заголовком "Новый подход для высокопроизводительного метаболического скрининга здоровых растений стабильными изотопами."Конкретно эта статья.
Изображение Рисунок 1. Оборудование, разработанное и построенное для исследований маркировки 13C и 15N in vivo. A, Большой трубчатый реактор (диаметр 0,5 м, высота 1,3 м и объем 255 л) для маркировки 13CO2 выращиваемых в почве растений риса. B, малогабаритный трубчатый реактор (диаметр 0,5 м, высота 0,5 м и объем 98 л) для маркировки 13CO2 почвенных саженцев риса. C, бокс-реактор (0,5 х 0,5 х 0,5 м, объем 125 л) для одновременной маркировки 13CO2 и 15NH4NO3 гидропонных саженцев риса. Все реакторы были оснащены системой контроля температуры, содержащей вентилятор с водяным охлаждением на нижней пластине реактора и внешний криостат. Кроме того, внешняя установка для адсорбции CO2 состояла из мощного насоса, адсорбера и мелкого пылевого фильтра. Перед экспериментами выбранные растения помещали в реактор, который затем закрывали газонепроницаемым резиновым уплотнением. Окружающий CO2 удаляли из реактора в течение 30 с. Эксперименты начинались путем впрыскивания требуемых количеств 13CO2 через клапан впрыска в крышку каждого реактора. Изображение Рисунок 3. Относительные потоки ассимилированного углерода и азота в саженцах риса, выращиваемых на гидропонике, в условиях контроля (А) и подвергшихся воздействию солевого стресса (100 микроМ NaCl в течение 6 дней; В), рассчитанные данные по обогащению13C и 15N получены через 2 часа после импульсов маркировки (Фиг.2). Соотношение корни- побеги для проростков в контрольных условиях (0,173) и проростки, подвергнутые высокой солености (0,165), рассчитывали по распределению меток 15N с использованием уравнений 4 и 6. Исходя из этого соотношения, установлено относительное перераспределение меток между побегом и корнем. Общее количество ассимилированного углерода и азота в нулевой момент времени было взято за 100% поглощенного углерода и азота, соответственно, для обеспечения относительных данных. Проростки анализировали на протяжении 12 дней. Полные наборы данных приведены в дополнительной таблице S1. Изображение Изображение
Мы с марта 2015 обсуждаем фотографии поведения цветка в аквариуме и убеждения Дмитрия про невозможность усвоения СО2 листьями растений.При этом не приведя ни одной цифры замеров нахождения цветка в стекле. Точнее,замеров не было вообще никаких.
А в этой статье группа нем.ученых провела похожий,но более продвинутый опыт по усвоению растениями риса СО2 через листья и аммиачной селитры через корни. Будучи более грамотными товарищами и не надеясь только на свои хорошо подвешенные языки,они подключили современные высокоточные измерительные приборы и оцифровали этот опыт. Более того,чтобы сделать процесс усвоения растением СО2 и селитры видимым,они пометили их радиоактивными изотопами.Воздух внутри реакторов они откачивали,ощищали от СО2,и подавали через инжектор 13СО2 в концентрации 0,04% (т.е.как в естественной природе).И на основании проведенных замеров сделали уже свои выводы.
Не правда ли,интересно? кстати,на иллюстрации усвоения растением СО2 слово "Sucrose" переводится-сахароза.
Статью я перевел на русский.Завтра начну выкладывать ее перевод.
С уважением,Владимир.
Аватара пользователя
Владимир Александрович
Завсегдатай
Сообщения: 1068
Зарегистрирован: 09 фев 2010, 19:11
Город: Волгоград
Подпись: Владимир
Благодарил (а): 0
Поблагодарили: 0

Re: Опыт по опровержению теории питания растений

Сообщение Владимир Александрович »

Новый подход для высокопроизводительного метаболического скрининга здоровых растений стабильными изотопами.
"Здесь мы демонстрируем метаболическое профилирование целого растения с помощью маркировки стабильными изотопами и масс-спектрометрии с изотопным отношением горения для точной количественной оценки ассимиляции, транслокации и молекулярного перераспределения 13CO2 и 15NH4NO3. Эта технология была применена к растениям риса (Oryza sativa) на разных стадиях роста. Для взрослых растений маркировка 13CO2 показала усиленное усвоение углерода флаговыми листьями от цветения до поздней стадии наполнения зерна, связанное с эффективной транслокацией в метелку. Одновременную маркировку 13CO2 и 15NH4NO3 с помощью гидропонизованных саженцев использовали для количественной оценки относительного распределение углерода и азота. Через два часа после маркировки ассимилированный углерод в основном сохранялся в побеге (69%), тогда как 7% попадали в корень и 24% удалились в процессе дыхания. Азот, взятый через корень, был в значительной степени перемещен в побег (85%). Саженцы при сильном солевом стрессе показали снижение поглощения и транслокации азота (69%), тогда как углеродный метаболизм не был затронут. Использование газового хроматографа для анализа меченных атомов выявил обогащение белковогенными аминокислотами. Это выявило значительный синтез белка в метелке взрослых растений, тогда как биосинтез белка во взрослых листьях был в 8 раз ниже, чем в побегах рассады. Как правило, обогащение аминокислот было сходным среди семейств биосинтеза и позволило нам определить динамику их предшественников. Исходя из этого, раннее и сильное обогащение 13С пути Эмбдена -Мейерхофа-Парнаса (другими словами-гликолиза, прим.мое) и промежуточных продуктов пентозофосфатного пути указывало на высокую активность этих путей. Примененный анализ к режиму воздействия гербицидов показал сильное нарушение синтеза аминокислот с разветвленной цепью при обработке имизапиром. Установленная технология демонстрирует прорыв для количественного высокопроизводительного метаболического фенотипирования растений.
Метаболически исследованные культуры очень желательны для обеспечения глобального продовольственного снабжения (Khush, 2003) и для производства различных химических веществ и материалов (Fischer и Эманс, 2000; Шарма и Шарма, 2009). Без сомнения, адаптированная инженерия для метаболизма растений требует хороших знаний об основном метаболизме. Это объясняет большой интерес к инструментам и технологиям для анализа установок на уровне систем. В частности, анализ метаболических путей растений и внутриклеточных потоков с помощью изотопных экспериментов, связанных с масс-спектрометрией (МС) и ЯМР (Ratcliffe and Shachar-Hill, 2006; Young et al., 2011), имеет прогностическую способность для метаболической инженерии (Kruger and Ratcliffe, 2009; Shachar-Hill, 2013). Такие анализы, представленные для культур клеточной суспензии (Rontein et al., 2002; Kruger et al., 2007; Williams et al., 2008) и отдельных органов растений, таких как листья (Schaefer et al., 1980; Cegelski and Schaefer, 2005; Hasunuma et al., 2010), клубни (Roessner-Tunali et al., 2004) и семена (Schwender et al., 2003; Junker et al., 2007) обеспечивают ценное понимание метаболизма, но не описывают поведение целых растений (Allen et al., 2009), что необходимо для получения системной картины метаболических функций в физиологически значимых условиях (Cliquet et al., 1990; Römisch-Margl et al., 2007). Это преодолевается путем проведения экспериментов по изотопному маркированию на всех растениях, предпочтительно с использованием 13CO2, гораздо более безопасного соединения, нежели его радиоактивно- меченый эквивалент 14CO2 (Römisch-Margl et al., 2007) в сочетании с анализом меток с помощью Масс-спектрометрии и ЯМР (Chen et al., 2011). Однако, такие эксперименты страдают от продолжительности времени маркировки в несколько часов или даже дней (Hutchinson et al., 1976; Nouchi et al., 1995; Wu et al., 2009) и концентрации CO2 за пределами естественной величины, чтобы достичь видимых количеств обогащения (Römisch-Margl et al., 2007). Например, применение повышенных уровней СО2 может вызывать изменения в метаболизме растений (например, отношение сток-исток, фотосинтетическую активность и дыхание), тем самым влияя на улавливание углерода и рост (Arp, 1991; Zhu et al., 2014). По сравнению с обычными Масс-спектрометрией (0,05 ат.%) И ЯМР, масс-спектрометрия с отношением горения и изотопа (C-IRMS) обеспечивает гораздо более высокую точность (0,0002 атом.%, Meier-Augenstein, 1999), что делает этот метод особенно привлекательным для анализа растений при низком обогащении. Высокая точность C-IRMS даже позволяет проводить метаболические исследования без предшествующего применения индикатора (Tcherkez et al., 2003; Yousfi et al., 2012, 2013). Отдельные приложения, которые связывают C-IRMS с элементарным анализом (EA), были использованы для отслеживания процессов усвоения и оборота в растениях (Cliquet et al., 1990; Dyckmans et al., 2000; Nogués et al., 2004) как анализ взаимодействия растений с микробным сообществом почвы (Griffiths et al., 2004; Leake et al., 2006; Wu et al., 2009). При наличии газовой хроматографии (GC), соединенной с C-IRMS, анализ обогащения может быть нацелен на отдельные метаболические соединения, такие как сахара, жирные кислоты и аминокислоты (Derrien et al., 2004; Olsson et al., 2005; Molero et al., 2011; Lattanzi et al., 2012).
Здесь мы опишем новый подход, который объединяет исследования целых растений на основе 13C- и 15N с последующим анализом меток у целых растений, урастительных тканей и отдельных метаболитов с использованием EA-C-IRMS и GC-C-IRMS для метаболизма in vivo снятие отпечатков пальцев модели посевов риса (Oryza sativa) в физиологически значимых условиях. Для изотопных экспериментов были спроектированы и сконструированы специальные реакторы маркировки, которые позволили сделать точную маркировку растений 13С, а также одновременную трассировку 13C и 15N в условиях окружающей среды. Это имело большое преимущество по сравнению с предыдущими исследованиями: применимость естественной концентрации 13CO2 и коротких периодов маркировки в сильно контролируемых условиях относительно света, температуры и влажности. Разработанный подход применялся для сравнения рисовых растений на разных стадиях развития, касающихся ассимиляции, транслокации и включения меток в метаболические промежуточные продукты после однократной или двойной маркировки с помощью 13CO2 и 15NH4NO3. В частности, исследования, объединяющие инкубацию метками 13C и 15N в растения, редко встречаются (Cliquet et al., 1990; Dyckmans et al., 2000). Тем самым изучалось взаимодействие углерод-азотного метаболизма и соответствующих соотношений между стоками и истоками отдельных органов растений. Кроме того, был выявлен фенотип, вызванный стрессом из-за воздействия на саженцы риса высокой солености, главного абиотического стресса. Изучение режима действия гербицидной обработки еще раз подчеркнуло высокий потенциал метода для достоверного количественного определения метаболических изменений. Разработанная технология предоставляет биоинженерам сложный инструмент для быстрого скрининга и метаболического профилирования отдельных фенотипов, который прекрасно дополняет более требовательный изотопически нестационарный анализ метаболического потока (Szecowka et al., 2013; Ma et al., 2014), чтобы получить полную картину метаболизма растений."
Продолжение следует.
С уважением,Владимир.
Аватара пользователя
Владимир Александрович
Завсегдатай
Сообщения: 1068
Зарегистрирован: 09 фев 2010, 19:11
Город: Волгоград
Подпись: Владимир
Благодарил (а): 0
Поблагодарили: 0

Re: Опыт по опровержению теории питания растений

Сообщение Владимир Александрович »

Сегодняшний отрывок статьи немецких ученых хочу начать со своих замечаний. Авторы показали путь маркированной 13СО2:листья-стебель-затем в корень либо в метелку.Считаю,что стоит внести ясность про невозможность альтернативного пути,который пропагандирует Дмитрий и иже с ним,т.е.сначала в корень, потом перемещение по стеблю в листья,где и происходит фотосинтез. А затем обратная транслокация.Не возможно по времени.Обращаю внимание на две вещи:первое-время инкубации в опытах всего 10 минут,а далее измерение усвоения и транслокации.И второе-слова Дмитрия,что диффузия эффективна на малых расстояниях. Тут я с ним никогда не спорил. Более того,добавлю что диффузия эффективна в средах,имеющих небольшую плотность. Существует известная формула распространения диффузии в различных средах:T(время)=X*X(расстояние в кв.м)/4*Di,где Di-коэффициент диффузии в разных средах.Di=1,5*10ст.-5 кв.м/сек для воздуха,для воды Di=1,5*10ст.-9, для земли усредненно Di=1,5*10ст-7. Т.е.коэф-т диффузии в земле в 100 раз меньше,чем в воздухе и в 100 раз больше,чем в воде. Из изображения опытов видно,что согласно Дмитрия 13СО2 для диффузии в корни надо преодолеть хотя бы 10 см в землю,либо те же 10 см в воду(для гидропонно-выращиваемых растений). Так вот,подставив эти данные в формулу,высчитаем,что в землю 13СО2 будет диффундировать 16 667 секунд или 4,6 часа. А в воду на эти 10 см будет проникать 460 часов или примерно 20дней. В воздухе это расстояние угл.газ преодолеет за 167 секунд или 3 минуты. Доходчиво?
"РЕЗУЛЬТАТЫ.
Конструкция обогащающих реакторов и экспериментальный дизайн.
Были спроектированы, сконструированы и подтверждены три размера и типа реакторов маркировки в их пригодности при исследованиях по маркировке 13С in vivo (рис.1): два трубчатых реактора для исследований 13СО2 на взрослых растениях, выросших в грунте (250 л) и сеянцев (100 л), соответственно, и ящик для комбинированных исследований маркировки 13CO2 и 15NH4NO3 саженцев, выросших на гидропонном растворе, (125 л). Во всех реакторах используемый стеновой материал допускал полную передачу света (дополнительный рисунок S1), а температуру и влажность можно было поддерживать на желаемых значениях (Фиг. S2). Следовательно, реакторы позволяли растениям маркироваться с тем же светом, температурой и режимом влажности, с которыми они выращивались в парниках (фитокамеры). Немедленная замена окружающего CO2 на эквимолярный уровень 13CO2 осуществлялась с помощью поглотителя, подключенного к реактору. Была проведена первая серия экспериментов с саженцами риса, выросшими в грунте, для определения оптимальных условий поставки меченых атомов (400 или 700 микро-л/л-1 13CO2) и периода времени инкубации с 13CO2 (10, 60 и 180 мин; дополнительная фигура S3). Короткое время инкубации 10 мин при естественном уровне 13CO2 (400 микро-л/л-1) было достаточным, чтобы обеспечить точную оценку усвоения углерода из-за высокой точности измерения EA-C-IRMS (дополнительный рисунок S3A). В этих условиях побеги рисовых саженцев показали выраженное обогащение 13C (то есть значение d= 170 ‰ +_ 6 ‰). Низкий процент отклонения подчеркивает, что ассимиляция была количественно оценена с превосходной воспроизводимостью, особенно учитывая высокую сложность изучаемой системы растений. Значения обогащения находились в равном диапазоне после одновременной маркировки одного, трех, шести или 12 растений в одном и том же реакторе в течение 60 мин, что указывает на то, что даже более крупные наборы растений и более длительное время инкубации не приводят к ограничению CO2 (дополнительный рисунок S3B ). Чтобы исследовать суточные эффекты на фотосинтез и ассимиляцию СО2, исследования изотопной маркировки с саженцами проводились каждые 1 ч в промежутках времени от 2,5 до 9,5 ч после восхода солнца. Маркировка растений в разные часы не выявила существенных отличий от растений, помеченных в полдень (через 6,5 ч после восхода солнца, на фиг. S3C).
Соответственно, текущий рабочий процесс был следующим. Растения риса выращивались в фитокамерах под воздействием атмосферного воздуха, пока они не были помещены внутрь корпуса незадолго до эксперимента по маркировке. Естественный CO2 затем удаляли из реактора в течение 30 с и заменяли эквимолярным количеством 13CO2 (400 мл/ л-1). Через 10 мин инкубации в этой атмосфере растения удаляли из реактора и либо собирали непосредственно для оценки усвоения углерода, либо культивировали далее в фитокамере для оценки транслокации углерода. Для одновременного отслеживания 15N корни саженцев, выросших на гидропонике, были обеспечены 15NH4NO3. Изотопное обогащение собранного растительного материала и экстрагированных аминокислот определяли, используя EA-C-IRMS и GC-C-IRMS, соответственно.
Комбинированная оценка углеродного и азотного метаболизма в сеянцах риса.
Разработанный подход затем использовался для комбинированной маркировки 13CO2 и 15NH4NO3 выращиваемых на гидропонике саженцах риса, чтобы получить интегрированную картину метаболизма углерода и азота (рис.2). Изотопно-маркированная15NH4NO3 (амм.селитра) была предоставлена корням, в то время как 13CO2 подавали на побеги посева риса с использованием сконструированного коробочного реактора (рис.1C). Сразу же после облучения в побеге было обнаружено максимальное 13C-обогащение (450 ‰ +_45 ‰, фиг.2A), тогда как маркировка 15N была самой высокой для корня (4 130 ‰ +_ 25 ‰, фиг.2C). Тем не менее перенос углерода и азота оказался быстрым, потому что значительное обогащение 15N в этот момент времени уже было обнаружено в побеге (190 ‰ +_ 25 ‰, рис. 2D). Аналогично, корень содержал незначительные количества 13C (15 ‰ +_ 5 ‰, фиг.2B). В течение 2 ч после ассимиляции уровни 15N и 13C были равномерно уравновешены. Во время непрерывного периода слежки значения 13C и 15N постоянно снижались в корне и стебле. Благодаря интеграции измеренных данных обогащения 13C и 15N теперь можно было определить процент перераспределения метки в течение 2 часов после облучения метками (рис.3), обеспечивая тем самым быстрый и количественный доступ к относительным потокам углерода и азота в рисовых растениях.
Соотношение корень/ стебель, рассчитанное по данным маркировки по уравнению 4 (см. «Материалы и методы»), составило 0,173. Это показало правильную оценку в соответствии с ранее сообщаемыми значениями для риса между 0,05 и 0,3 (Yoshida, 1981). Большинство ассимилированного азота (85%) переносилось в побег (рис.3А), тогда как в корнях оставалось всего 15%. Что касается ассимилированного углерода, основная фракция (69%) была сохранена в побеге, тогда как только 7% было перемещено в корни. В результате этого растением в течение 2 ч после усвоения было освоено 76% ассимилированного углерода, что указывало на потерю 24% через дыхание. Ассимилированного углерода в побегах было немного выше, чем у растений кукурузы (Zea mays), в которых 53% из 13C использовалось внутри побега при удлинении (Meng et al., 2013). Тот же расчет, используя данные маркировки из образцов, взятых через 24 часа после инкубации (т.е. включая темновой период), показал увеличение потерь углерода через дыхание на 52% (данные не показаны), что хорошо согласуется с соответствующими данными, полученными при измерении производства сухого вещества, фотосинтеза и дыхания (Tanaka and Yamaguchi, 1968)."
Продолжение следует.
С уважением,Владимир.
Ответить

Вернуться в «Физиология винограда - почему и зачем»

Кто сейчас на конференции

Сейчас этот форум просматривают: Plot-nik, Вера К., ЮРИЙ2014 и 282 гостя